工業技術研究院

技術簡介

因為細胞內有分解peptide的酵素，所以用微生物當表現宿主，以重組DNA方式生產小peptide，通常會遭遇產物在細胞內被分解的困難，開發分泌式表現系統是針對這個困難的解決方法，基於安全的考量，我們選擇食品級的微生物—麵包酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)當作表現宿主，開發分泌式表現系統，生產骨質疏鬆藥物降血鈣素(calcitonin)。

Abstract

none

技術規格

我們以Backtranslation的方式，參考麵包酵母菌的codon usage，設計降血鈣素基因的DNA序列，用gene assembly的方法合成降血鈣素基因，再將基因接到分泌式表現質體，然後進行轉型(transformation)，將帶有基因的分泌式表現質體送入麵包酵母菌的細胞內，我們已經用酵母菌的轉型株(transformant)進行三角瓶發酵，降血鈣素與amylase的融合蛋白質(fusion protein)產量達到100mg/L，也完成了單獨降血鈣素的發酵，產量達到6mg/L，接下來要進行

Technical Specification

none

技術特色

分泌式表現系統有下列製程方面之優勢: –避免胞內酵素分解peptide產物 –減少胞內氨基酸材料之損耗 –不需打破細胞，減少製程之步驟 –產物分泌到培養液之中，產物之分離純化比較容易

應用範圍

我們目前是以降血鈣素基因來建立分泌式表現系統，生產3.5kD的降血鈣素peptide，但是這套表現系統不只能用來生產小分子peptide，也能用來生產大分子蛋白質(例如蛋白質藥物，或是酵素)，預計這套表現系統可以應用來生產3.5kD ~ 150kD分子量的產物。

接受技術者具備基礎建議（設備）

需要不同大小的發酵槽與分離純化之設備。

接受技術者具備基礎建議（專業）

需具備分子生物學、生物化學之知識，與發酵製程之專業經驗

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