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工業技術研究院

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技術名稱: 重組人工胜月太分泌式表現系統開發

技術簡介

因為細胞內有分解peptide的酵素,所以用微生物當表現宿主,以重組DNA方式生產小peptide,通常會遭遇產物在細胞內被分解的困難,開發分泌式表現系統是針對這個困難的解決方法,基於安全的考量,我們選擇食品級的微生物—麵包酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)當作表現宿主,開發分泌式表現系統,生產骨質疏鬆藥物降血鈣素(calcitonin)。

Abstract

none

技術規格

我們以Backtranslation的方式,參考麵包酵母菌的codon usage,設計降血鈣素基因的DNA序列,用gene assembly的方法合成降血鈣素基因,再將基因接到分泌式表現質體,然後進行轉型(transformation),將帶有基因的分泌式表現質體送入麵包酵母菌的細胞內,我們已經用酵母菌的轉型株(transformant)進行三角瓶發酵,降血鈣素與amylase的融合蛋白質(fusion protein)產量達到100mg/L,也完成了單獨降血鈣素的發酵,產量達到6mg/L,接下來要進行

Technical Specification

none

技術特色

分泌式表現系統有下列製程方面之優勢: –避免胞內酵素分解peptide產物 –減少胞內氨基酸材料之損耗 –不需打破細胞,減少製程之步驟 –產物分泌到培養液之中,產物之分離純化比較容易

應用範圍

我們目前是以降血鈣素基因來建立分泌式表現系統,生產3.5kD的降血鈣素peptide,但是這套表現系統不只能用來生產小分子peptide,也能用來生產大分子蛋白質(例如蛋白質藥物,或是酵素),預計這套表現系統可以應用來生產3.5kD ~ 150kD分子量的產物。

接受技術者具備基礎建議(設備)

需要不同大小的發酵槽與分離純化之設備。

接受技術者具備基礎建議(專業)

需具備分子生物學、生物化學之知識,與發酵製程之專業經驗

技術分類 藥物治療

聯絡資訊

聯絡人:蔡元彰 藥效與藥動研究室

電話:+886-3-5743910 或 Email:yjtsai@itri.org.tw

客服專線:+886-800-45-8899

傳真:+886-3-5732359

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